NUGC-4 人胃癌细胞使用说明书

产品编号：HY-A001 | 英文名称：Human Gastric Cancer Cell Line NUGC-4 | 细胞别称：NUGC4/NU-GC-4

一、产品基本信息

二、细胞接收

1. 冻存细胞接收

如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮储存或短暂（24h）放至-80°C冰箱保存，或直接进行细胞复苏。

2. 活细胞接收

如果是T25瓶活细胞运输：

1. 收到后用75%的酒精对T25瓶外表面进行消毒

2. 放在5% CO₂、37°C的细胞培养箱静置2h

3. 静置后取出细胞瓶，在显微镜下观察细胞贴壁情况和细胞汇合度

4. 分别在100×和40×下各拍2个不同视野的细胞照片记录

处理建议：

● 如果汇合度达到80%以上的传代密度，可以进行传代操作

● 如果细胞汇合度未达到80%以上，弃掉瓶内培养基，更换新鲜专用培养基

注意事项：

● 收到细胞后，活细胞首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否漏液、浑浊等现象

● 冻存细胞若发现干冰已挥发完、冻存管瓶盖脱落、破损等异常情况，请务必拍照保留，并于收货24h内与我们联系

三、培养条件

四、细胞复苏

准备工作

1. 将培养液置37°C水浴锅预热30分钟

2. 将冻存的细胞从液氮中取出，转移到-80°C冰箱，放置数分钟让残余液氮挥发

复苏步骤

1. 在超净台内用吸管吸取6-7mL培养液至15mL离心管中

2. 将细胞从-80°C冰箱取出，复苏时稍稍甩动，去除残留的干冰和液氮

3. 迅速用镊子夹住盖子放入37°C水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在1分钟左右全部融化

4. 用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，稍稍晾干

5. 用单道移液器将所有融化的细胞悬液转至提前准备好的培养液中

6. 1100rpm室温离心4分钟收集细胞

7. 小心吸弃上清，用1mL新鲜培养液重悬细胞至单细胞悬液

8. 转移至装有4mL培养液的T25cm²培养瓶中，写上细胞名称、复苏日期、代次

9. 放置37°C、5% CO₂饱和湿度培养箱内培养

注意：请勿直接复苏到T75cm²瓶或10cm的皿。

五、细胞传代

传代时机

常规细胞长至80%-90%汇合度即可传代。

传代步骤

1. 在超净台内把培养瓶里的培养液倒至废液缸

2. 用1× PBS洗涤细胞1-2次（T25cm²培养瓶添加约2-3mL），以去除残余的培养液和血清

3. 加入0.25%胰酶溶液（T25cm²培养瓶约1-2mL），轻轻晃动瓶子并使yi酶全部浸过细胞

4. 将培养瓶放入培养箱孵育1-2分钟（若细胞难以消化，可适当延长孵育时间）

5. 在显微镜下观察到大部分细胞变圆不贴壁，轻轻晃动和敲击培养瓶两侧有大量细胞脱离时，立即加入2倍胰酶体积的培养液终止消化

6. 轻吹打细胞数次，使所有细胞脱壁（注意：吹散细胞时动作要轻柔）

7. 1100rpm室温离心4分钟

8. 弃上清，加2mL培养基重悬细胞

9. 按一定接种比例传代，第一次建议1:3进行传代

六、细胞冻存

冻存步骤

1. 按细胞传代的方法，将细胞消化至单细胞悬液，加入培养基终止反应

2. 取20μL进行细胞计数

3. 1100rpm室温离心4分钟

4. 倒去上清，用1-2mL 4°C预冷的冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬细胞

5. 调整细胞密度为1×10⁶-1×10⁷个细胞/mL

6. 将细胞悬液按1mL/管平均分装至冻存管中，旋紧盖子，贴好标签（细胞名称、代次、数量、冻存日期）

7. 将冻存管放置于4°C预冷的程序降温盒中，15分钟内转移至-80°C超低温冰箱

8. 过夜后，将冻存细胞转移至液氮罐内长期保存

七、产品应用

NUGC-4细胞是胃癌研究领域的经典体外模型，适用于：

● 胃癌发病机制研究：低分化腺癌的分子病理机制

● 肿瘤转移研究：淋巴结转移特性、侵袭转移机制

● 药物筛选：化疗药物敏感性评价、靶向药物筛选

● 信号通路研究：IL-1α非依赖性炎症信号通路

注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代，避免过度生长

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长，避免细胞损伤

4. 轻柔操作：吹打细胞时动作轻柔，减少机械损伤

5. 定期鉴定：建议每6-12个月进行STR鉴定

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验

7. 用途限制：限于科研用途

九、技术支持

CellFactory（西安禾洋生物科技有限公司）提供完整培养方案、实验设计建议