​NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞培养全攻略

一、产品概述

CellFactory NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞（货号：HY-C027）是细胞生物学和分子生物学研究领域zui经典、应用zui广泛的细胞系之一。该细胞源自NIH Swiss小鼠胚胎，具有高度的自发转化敏感性和接触抑制缺失特性，是研究细胞转化、癌基因功能、DNA转染及病毒学的理想工具。本文将详细介绍NIH-3T3细胞的培养方法、操作要点及注意事项，助力科研人员获得高质量的实验数据。

二、培养前准备

1. 培养基配制

关键提示：NIH-3T3细胞对血清质量敏感，建议使用高质量、批次稳定的胎牛血清，以确保细胞状态良好。

2. 培养器具准备

培养瓶：推荐使用25cm²或75cm²培养瓶

消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液

   PBS：1×磷酸盐缓冲液，用于细胞洗涤

离心管：15mL或50mL无菌离心管

三、细胞复苏操作

1. 标准复苏流程

    CellFactory推荐方法：

 (1)预热培养基：将wan全培养基置于37℃水浴锅预热30分钟

 (2)取出冻存管：从液氮中取出冻存管，迅速转移至-80℃冰箱数分钟，让残余液氮挥发

 (3)快速解冻：将冻存管放入37℃水浴中快速晃动（水不能没过盖子），1分钟内wan全融化

 (4)消毒转移：用70%酒精消毒冻存管外壁，将细胞悬液转移至含10mL预热培养基的离心管中

 (5)离心收集：1100rpm室温离心4分钟

 (6)重悬接种：弃上清，用新鲜wan全培养基重悬细胞，转移至培养瓶中培养

注意：请勿直接复苏到T75cm²大培养瓶，建议先使用T25cm²培养瓶。

四、细胞传代操作

1. 传代时机

  当细胞汇合度达到80%-90%时进行传代。NIH-3T3细胞具有接触抑制缺失特性，可过度生长，但建议及时传代以维持细胞状态。

2. 传代步骤

 (1)洗涤：吸去旧培养基，用PBS洗涤细胞1-2次，去除残余血清

 (2)消化：加入0.25%胰蛋白酶-EDTA，37℃孵育2-3分钟

 (3)观察：显微镜下观察到细胞变圆、间隙增大时，加入含血清培养基终止消化

 (4)收集：轻柔吹打细胞，使其wan全脱壁，转移至离心管

 (5)离心：1100rpm室温离心4分钟

 (6)重悬传代：弃上清，新鲜培养基重悬，按1:3至1:6比例传代

关键要点：NIH-3T3细胞贴壁较松，消化时间不宜过长，避免过度消化损伤细胞。

五、细胞冻存操作

1. 冻存条件

2. 2. 22. 冻存步骤

 (1)选择对数生长期、状态良好的细胞

 (2)胰酶消化收集细胞，离心后弃上清

 (3)用预冷冻存液重悬细胞，调整密度

 (4)分装至冻存管，标注细胞名称、代次、日期

 (5)程序降温盒中4℃预冷，-80℃过夜

 (6)次日转移至液氮罐长期保存

六、培养注意事项

1. 接触抑制缺失特性

  NIH-3T3细胞失去正常接触抑制，可过度生长形成多层细胞。建议：

 (1)及时传代，避免细胞过度密集

 (2)保持适宜接种密度，确保细胞均匀分布

2. 转化敏感性

 (1)该细胞具有高度自发转化倾向，需注意：

 (2)控制传代次数，建议使用低代次细胞

 (3)定期观察细胞形态，发现异常及时处理

3. 血清质量

细胞对血清批次敏感，建议：

 (1)使用同一批次血清，保持实验条件一致

 (2)更换血清批次时，需进行细胞适应性培养

4. 无菌操作

 (1)所有操作在生物安全台内进行

 (2)严格无菌操作，避免污染

 (3)定期检测支原体，确保细胞质量

七、CellFactory质量保证

八、应用领域

CellFactory NIH-3T3细胞广泛应用于：

 (1)细胞转化研究：癌基因功能、抑癌基因研究

 (2)病毒学研究：逆转录病毒包装、基因治疗载体

 (3)分子生物学：DNA转染、基因表达分析

 (4)药物筛选：抗肿瘤药物、细胞毒性评价

 (5)信号通路：生长因子信号、细胞周期调控

九、技术支持

CellFactory（西安禾洋生物科技有限公司）提供完整NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞培养方案及技术指导！

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